EnVision™ FLEX+, Mouse, High pH, (Dako Autostainer/Autostainer Plus)
Kod K8012
Utgåva 6
Detta kit innehåller tillräckligt med reagens för 400–600 tester. För Dako Autostainer/Autostainer Plus.
Valfria reagenser:
Kod Produktnamn Tester
K8004 EnVision™ FLEX Target Retrieval Solution, High pH (50x) 200-430 K8005 EnVision™ FLEX Target Retrieval Solution, Low pH (50x) 200-430
K8006 EnVision™ FLEX Antibody Diluent 400-600
K8007 EnVision™ FLEX Wash Buffer (20x) K8018 EnVision™ FLEX Hematoxylin,
(Dako Autostainer/Autostainer Plus)
400-600
K8019 EnVision™ FLEX+ Rabbit (LINKER), (Dako Autostainer/Autostainer Plus)
120-190
K8022 EnVision™ FLEX+ Mouse (LINKER), (Dako Autostainer/Autostainer Plus)
120-190
Andra alternativ
K8020 FLEX IHC objektglas för mikroskop 500
Innehåll
Sid.
Avsedd användning ... 3
Sammanfattning och förklaring ... 3
Reagenser ... 4
A. Medföljande material... 4
B. Nödvändigt material som inte medföljer ... 4
C. Valfria reagenser ... 5
Försiktighetsåtgärder ... 5
Förvaring ... 7
Reagensberedning ... 7
Provtagning och preparation... 7
Procedur... 8
A. Förbehandlingsprocedur ... 8
B. Färgningsprocedur... 9
Kvalitetskontroll ... 10
Resultattolkning ... 10
Begränsningar ... 10
Förklaring av symboler ... 11
Avsedd användning
För in vitro-diagnostik.
Dako EnVision™ FLEX+ detektionssystem är avsett för användning i immunhistokemi tillsammans med Dako Autostainer/Autostainer Plus-instrument. Systemet detekterar primära mus- och kaninantikroppar och reaktionen visualiseras genom EnVision™ FLEX DAB+ Chromogen. Vid användning med
EnVision™ FLEX+ Mouse (LINKER) eller EnVision™ FLEX+ Rabbit (LINKER) (kod K8019) kan signalamplifiering av primära musantikroppar respektive primära kaninantikroppar uppnås. EnVision™
FLEX+ reagenser är avsedda för användning på formalinfixerade, paraffininbäddade vävnadssnitt.
Sammanfattning och förklaring
Dako EnVision™ FLEX+ detektionssystem, har utformats för att vara ett flexibelt system och ge en optimal färgning på Dako Autostainer/Autostainer Plus-instrument, vid användning av protokollen som rekommenderas i detta produktblad. Som en riktlinje ökas signalamplifiering vid användning av EnVision™ FLEX+ Mouse (kod K8012) 4–5-faldigt och vid användning av EnVision™ FLEX+ Rabbit (kod K8019, valfritt reagens) ökas signalamplifiering 2–3-faldigt.
Före färgning skall formalinfixerade, paraffininbäddade vävnadssnitt utsättas för avparaffinering och hydrering följt av värmeinducerad epitopåtervinning (HIER) med användning av den
målåtervinningsmetod som specificerats i produktbladet för den primära antikroppen. Se även avsnittet om proceduren för 3-i-1 provberedning. Kod K8012 innefattar EnVision™ FLEX Target Retrieval Solution, High pH (50x). Alternativt rekommenderas EnVision™ FLEX Target Retrieval Solution, High pH (50x) (kod K8004) eller EnVision™ FLEX Target Retrieval Solution, Low pH (50x) (kod K8005). Vissa primära antikroppar kräver enzymatisk förbehandling av vävnad för optimal färgning i stället för HIER.
Endogen peroxidas skall blockeras med EnVision™ FLEX Peroxidase-Blocking Reagent (DM821), som inkluderas i detta kit. P.g.a. en effektiv tvättningsprocedur och närvaron av stabiliserande proteiner i Dako- reagenserna, är extra blockningssteg för att reducera icke-specifik bakgrundsfärgning inte nödvändigt.
EnVision™ FLEX Wash Buffer (20x) (DM831), som medföljer satsen eller som finns tillgänglig som valfri reagens (kod K8007), rekommenderas.
Primära antikroppar medföljer inte kitet. Vi rekommenderar användning av Dako FLEX Ready-to-Use Primary Antibodies eller Dako concentrated Primary Antibodies. EnVision™ FLEX Antibody Diluent (kod K8006) rekommenderas för spädningen av Dako concentrated Primary Antibodies.
EnVision™ FLEX+ Mouse (LINKER) (DM824), som medföljer i satsen eller som finns tillgänglig som valfri reagens (kod K8022), kan ersättas av EnVision™ FLEX+ Rabbit (LINKER) (kod K8019) vid användning av primära kaninantikroppar. EnVision™ FLEX+ Mouse (LINKER) och EnVision™ FLEX+
Rabbit (LINKER) kan appliceras för en valfri signalamplifiering av primära mus- respektive kaninantikroppar. Som en riktlinje: EnVision™ FLEX+ Mouse (LINKER) ger 4–5-faldig signalamplifiering och EnVision™ FLEX+ Rabbit (LINKER) ger 2–3-faldig signalamplifiering.
Dako EnVision™ FLEX/HRP detektionsreagens (DM802) i kitet består av en dextranryggrad, till vilken ett stort antal peroxidas- (HRP) molekyler och sekundära antikroppsmolekyler har kopplats. En unik kemi används för kopplingsreaktionen, vilken medger bindning av upp till 100 HRP-molekyler och upp till 20 antikroppsmolekyler per ryggrad.
Substratsystemet i kitet består av två komponenter: EnVision™ FLEX DAB+ Chromogen (DM827), en koncentrerad diaminobensidin- (DAB) lösning och EnVision™ FLEX Substrate Buffer (DM823)
innehållande väteperoxid. Före användning måste EnVision™ FLEX DAB+ Chromogen spädas i EnVision™ FLEX Substrate Buffer. Substratsystemet producerar en skarpt brun slutprodukt vid målantigenplatsen.
EnVision™ FLEX Hematoxylin (kod K8018) rekommenderas för motfärgning. Reagenset ger en klarblå nukleär färgning.
De färgade vävnadssnitten kan monteras med antingen vattenhaltigt monteringsmedium eller monteringsmedium baserat på organiskt lösningsmedel.
Reagenser
A. Medföljande material DM821
EnVision™ FLEX Peroxidase-Blocking Reagent 10 x 13 mL, bruksfärdig
fosfatbuffert innehållande väteperoxid, 15 mmol/L NaN3 och tvättmedel.
DM822
EnVision™ FLEX/HRP 10 x 13 mL, bruksfärdig
dextran kopplad till peroxidasmolekyler och sekundära antikroppsmolekyler från get mot kanin- och musimmunoglobuliner. I buffrad lösning innehållande stabiliserande protein och konserveringsmedel.
DM827
EnVision™ FLEX DAB+ Chromogen 3 x 3 mL
3,3'-diaminobensidintetrahydroklorid i organiskt lösningsmedel.
Reagensfärgen kan variera från starkt lila till färglös, utan att påverka kitets prestanda.
DM823
EnVision™ FLEX Substrate Buffer 20 x 13 mL
buffrad lösning innehållande väteperoxid och konserveringsmedel.
DM828
EnVision™ FLEX Target Retrieval Solution, High pH (50x) 9 x 30 mL, 50x koncentrerad
Tris/EDTA-buffert, pH 9 DM831
EnVision™ FLEX Wash Buffer (20x) 4 x 1 L, 20x koncentrerad
Tris-buffrad saltlösning innehållande Tween 20, pH 7,6 (±0,1).
DM824
EnVision™ FLEX+, Mouse (LINKER) 10 x 13 mL, bruksfärdig
buffrad lösning innehållande stabiliserande protein och ett antimikrobiellt medel.
B. Nödvändigt material som inte medföljer Dako Autostainer/Autostainer Plus-instrument Dako PT Link
Dako Proteinase K, bruksfärdig (vid behov)
Dako FLEX Ready-to-Use Primary Antibodies eller lämpligt utspädda koncentrerade primära kanin- eller musantikroppar från Dako
Dako FLEX Ready-to-Use Rabbit eller Mouse Universal Negative Control eller lämpligt negativt kontrollreagens för den primära antikroppen
Dako instrumenteringsmaterial
Objektglas för mikroskop, t.ex. FLEX IHC objektglas för mikroskop
Allmänna laboratoriereagenser för avparaffinering av paraffininbäddade vävnadssnitt Monteringsmedium (vattenhaltigt eller baserat på organiskt lösningsmedel) och täckglas
C. Valfria reagenser K8004
DM828
EnVision™ FLEX Target Retrieval Solution, High pH (50x) 3 x 30 mL, 50x koncentrerad
Tris/EDTA-buffert, pH 9 K8005
DM829
EnVision™ FLEX Target Retrieval Solution, Low pH (50x) 3 x 30 mL, 50x koncentrerad
citratbuffert, pH 6,1 K8006
DM830 EnVision™ FLEX Antibody Diluent 120 mL, bruksfärdig
Tris-buffert, pH 7,2, innehållande 15 mmol/L NaN3 samt protein.
K8007
DM831 EnVision™ FLEX Wash Buffer (20x) 1 L, 20x koncentrerad
Tris-buffrad saltlösning innehållande Tween 20, pH 7,6 (±0,1).
K8018
DM826 EnVision™ FLEX Hematoxylin 10 x 13 mL, bruksfärdig
vattenhaltig lösning av hematoxylin.
K8019
DM825 EnVision™ FLEX+ Rabbit (LINKER) 3 x 13 mL, bruksfärdig
buffrad lösning innehållande stabiliserande protein och ett antimikrobiellt medel.
K8022
DM824 EnVision™ FLEX+, Mouse (LINKER) 3 x 13 mL, bruksfärdig
buffrad lösning innehållande stabiliserande protein och ett antimikrobiellt medel
Försiktighetsåtgärder
1. För yrkesmässigt bruk.
2. EnVision™ FLEX/HRP, EnVision™ FLEX+ Mouse (LINKER) och EnVision™ FLEX+ Rabbit (LINKER) innehåller material av djurursprung och man kan inte utesluta att spår av humant material kan vara närvarande beroende på tillverkningsprocedurer. I likhet med alla produkter av biologiskt ursprung krävs en korrekt hantering.
3. Utsätt inte EnVision™ FLEX DAB+ Chromogen eller EnVision™ FLEX Substrate Working Solution för starkt ljus under proceduren.
4. EnVision™ FLEX Target Retrieval Solution, High pH (50x) och EnVision™ FLEX Target Retrieval Solution, Low pH (50x) innehåller 5-<10% Nonoxinol:
Varning
H319 Orsakar allvarlig ögonirritation.
H411 Giftigt för vattenlevande organismer med långtidseffekter.
P280 Använd skyddshandskar. Använd ögon- eller ansiktsskydd. Använd skyddskläder.
P273 Undvik utsläpp till miljön.
P264 Tvätta händerna grundligt efter användning.
P305 + P351 + P338
VID KONTAKT MED ÖGONEN: Skölj försiktigt med vatten i flera minuter.
Ta ur eventuella kontaktlinser om det går lätt. Fortsätt att skölja.
P337 + P313 Vid bestående ögonirritation: Sök läkarhjälp.
P501 Innehållet/behållaren lämnas som avfall i enlighet med lokala, regionala, nationella och internationella föreskrifter.
5. EnVision™ FLEX Wash Buffer (20x) innehåller 10-30% 2-Amino-2-(hydroxymethyl)propane-1,3- diol hydrochloride:
Varning
H319 Orsakar allvarlig ögonirritation.
H315 Irriterar huden.
P280 Använd skyddshandskar. Använd ögon- eller ansiktsskydd. Använd skyddskläder.
P264 Tvätta händerna grundligt efter användning.
P302 + P352 + P362-2 + P363
VID HUDKONTAKT: Tvätta med mycket tvål och vatten. Ta av nedstänkta kläder. Nedstänkta kläder ska tvättas innan de används igen.
P332 + P313 Vid hudirritation: Sök läkarhjälp.
P305 + P351 + P338
VID KONTAKT MED ÖGONEN: Skölj försiktigt med vatten i flera minuter.
Ta ur eventuella kontaktlinser om det går lätt. Fortsätt att skölja.
P337 + P313 Vid bestående ögonirritation: Sök läkarhjälp.
6. För EnVision™ FLEX Peroxidase-Blocking Reagent, kan datablad för materialsäkerhet beställas för yrkesanvändare.
7. EnVision™ FLEX DAB+ Chromogen innehåller 1–5 % 3,3’-diaminobensidintetrahydroklorid, och är märkt med:
Fara
H350 Kan orsaka cancer.
H341 Misstänks kunna orsaka genetiska defekter.
P201 Inhämta särskilda instruktioner före användning.
P202 Använd inte produkten innan du har läst och förstått säkerhetsanvisningarna.
P280 Använd skyddshandskar. Använd ögon- eller ansiktsskydd. Använd skyddskläder.
P308 + P313 Vid exponering eller misstanke om exponering: Sök läkarvård.
P405 Förvaras inlåst.
P501 Innehållet/behållaren lämnas som avfall i enlighet med lokala, regionala, nationella och internationella föreskrifter.
8. EnVision™ FLEX Antibody Diluent (kod K8016) innehåller natriumazid (NaN3), en kemikalie som är mycket giftig i ren form. I produktkoncentrationer kan natriumazid, trots att det inte klassificeras som farligt, reagera med bly- och kopparrör och bilda högexplosiva metallazider. Skölj med stora mängder vatten vid kassering så att inte metallazider ansamlas i avloppet.
9. Använd lämplig personlig skyddsutrustning för att undvika kontakt med ögonen och huden.
10. Oanvänd lösning måste kasseras i enlighet med lokala och statliga föreskrifter.
Förvaring
Förvara EnVision™ FLEX och EnVision™ FLEX+reagenser vid 2–8 °C.
Förvara EnVision™ FLEX Hematoxylin (kod K8018) i mörker vid rumstemperatur. Får inte användas efter det utgångsdatum som anges på flaskorna. Användaren måste validera alla
förvaringsförhållanden som avviker från de som specificerats. Den beredda Substrate Working Solution skall förvaras i mörker vid 2–8 °C och användas ino m fem dagar. Kontakta Dako Tekniska Support om oväntad färgning observeras som inte kan förklaras med variationer i laboratorieprocedurerna och om det misstänks vara problem med produkten.
Reagensberedning
A.1 EnVision™ FLEX Target Retrieval Solution, High pH (50x) (DM828, kod K8004)
Späd en tillräcklig mängd av EnVision™ FLEX Target Retrieval Solution, High pH (50x) 1:50 med användning av destillerat eller avjoniserat vatten för den planerade färgningsproceduren. Om Dako PT Link används för förbehandling, kan spädning utföras genom att tömma innehållet i flaskan med Target Retrieval Solution (50x) i Dako PT Link-tanken och tillsätta destillerat eller avjoniserat vatten till den markerade linjen (Fyllningslinjen). Oanvänd spädd lösning kan förvaras vid 2–8 °C i en månad.
Kassera lösningen om den är grumlig. När den används i PT Link för 3-i-1 provberedning kan den spädda lösningen användas 3 gånger inom en 5-dagarsperiod om den förvaras i rumstemperatur.
A.2 EnVision™ FLEX Target Retrieval Solution, Low pH (50x) (DM829, kod K8005)
Späd en tillräcklig mängd av EnVision™ FLEX Target Retrieval Solution, Low pH (50x) 1:50 med användning av destillerat eller avjoniserat vatten för den planerade färgningsproceduren. Oanvänd spädd lösning kan förvaras vid 2–8 °C i en månad. O m Dako PT Link används för förbehandling, kan spädning utföras genom att tömma innehållet i flaskan med Target Retrieval Solution (50x) i Dako PT Link-tanken och tillsätta destillerat eller avjoniserat vatten till den markerade linjen (Fyllningslinjen).
Kassera lösningen om den är grumlig. När den används i PT Link för 3-i-1 provberedning kan den spädda lösningen användas 3 gånger inom en 5-dagarsperiod om den förvaras i rumstemperatur.
A.3 EnVision™ FLEX Wash Buffer (20x) (DM831, kod K8007)
Späd en tillräcklig mängd av EnVision™ FLEX Wash Buffer (20x) 1:20 med användning av destillerat eller avjoniserat vatten för den planerade färgningsproceduren. Späd genom att tillsätta den
koncentrerade Wash Buffer till en föruppmätt mängd destillerat eller avjoniserat vatten för att minimera skumbildning. Rör försiktigt tills den spädda lösningen verkar homogen. Oanvänd spädd lösning kan förvaras vid 2–8 °C i en månad. Kassera lösningen o m den är grumlig. När den används i PT Link för 3-i-1 provberedning kan den spädda lösningen användas 3 gånger inom en 5-dagarsperiod om den förvaras i rumstemperatur.
A.4 EnVision™ FLEX Substrate Working Solution
EnVision™ FLEX Substrate Working Solution innehållande DAB, bereds genom att noggrant blanda 1 droppe EnVision™ FLEX DAB+ Chromogen (DM827) per 1 mL EnVision™ FLEX Substrate Buffer (DM823). Använd EnVision™ FLEX Substrate Working Solution inom 5 dagar (förvaras i mörker vid 2–8 °C).
Provtagning och preparation
Proverna kan vara formalinfixerade, paraffininbäddade vävnadssnitt.
Fixeringstiden beror på fixativet och vävnadens typ/tjocklek. Exempelvis bör vävnadsblock med en tjocklek på 3–4 mm fixeras i neutralbuffrat formalin i 18–24 timmar.
Den optimala tjockleken för paraffininbäddade snitt är ca 4 µm.
Proverna skall monteras på objektglas för mikroskop, t.ex. FLEX IHC objektglas för mikroskop (kod K8020). Snitten skall monteras på objektglasen så platta och släta som möjligt. Alltför många veck kommer att påverka färgningsresultaten.
OBS! Objektglasen för mikroskop måste ha en bredd som är lämplig för Dako Autostainer/Autostainer Plus-instrument. Se användarhandboken för det individuella Dako-instrumentet för en definition av användbara objektglas.
Paraffinsnitt skall monteras från ett förvärmt vattenbad innehållande destillerat eller avjoniserat vatten.
Vattenbadet får inte innehålla tillsatser (såsom gelatin, poly-L-lysin etc.). Snitten skall torkas genom uppvärmning, vanligen vid en temperatur på högst 60 °C, i minst 60 minuter. För att tillförsäkra lämplig vidhäftning av snitten vid objektglasen är det viktigt att tappa ut vattnet under snitten före
ugnstorkningsprocessen.
Procedur
Dako Autostainer/Autostainer Plus-instrument använder tekniker som baserats på olika principer för att erhålla ett optimalt färgningsresultat. Innan protokollen körs på Dako Autostainer/Autostainer Plus-instrument, läs noggrant användarhandboken för det angivna Dako-instrumentet.
För att fastställa reproducerbar epitopåtervinning rekommenderas att objektglashållaren alltid laddas full med objektglas. Detta säkerställer en identisk uppvärmning av snitt i varje körning.
A. Förbehandlingsprocedur
Rekommenderad 3-i-1 provberedningsprocedur med PT Link:
Avparaffinering, rehydrering och värmeinducerad epitopåtervinning (HIER) kan utföras på formalinfixerade, paraffininbäddade vävnadssnitt med användning av 3-i-1-proceduren.
1. Förbered en arbetslösning genom spädning av EnVision FLEX Target Retrieval Solution (50x) koncentrat 1:50 i destillerat eller avjoniserat vatten.
2. Fyll PT Link-tankar med tillräcklig mängd (1,5 L) arbetslösning för att täcka vävnadssnitten.
3. Ställ in PT Link att förvärma lösningen till 65 °C.
4. Sänk ned de monterade, formalinfixerade, paraffininbäddade vävnadssnitten i den förvärmda EnVision FLEX Target Retrieval Solution (arbetslösningen) i PT Link-tankar och inkubera i 20–40 minuter vid 97 °C. Den optimala inkubationsti den skall bestämmas av användaren.
5. Låt snitten svalna i PT Link till 65 °C.
6. Ta bort varje Autostainer objektglasställ med objektglas från PT Link-tanken och sänk med en gång ned objektglasen i ett kärl/en tank (t.ex. PT Link Rinse Station, kod PT109) med utspädd, rumstempererad EnVision FLEX Wash Buffer (20x).
7. Låt objektglasen ligga i den utspädda, rumstempererade EnVision FLEX Wash Buffer (20x), i 1–5 minuter.
8. Placera objektglasen på ett Dako Autostainer/Autostainer Plus-instrument och fortsätt med färgningen. Låt inte snitten torka under behandlingen eller under den påföljande
immunhistokemiska färgningsproceduren.
9. Efter färgning rekommenderas att man utför dehydrering, sköljning och permanent montering.
OBS! När den används i PT Link för 3-i-1 provberedning kan den spädda lösningen användas 3 gånger inom en 5-dagarsperiod om den förvaras i rumstemperatur.
HIER-procedur med PT Link:
Efter avparaffinering och hydrering till buffert (vatten), måste de flesta vävnadssnitt utsättas för värmeinducerad epitopåtervinning (HIER):
1. Förbered en arbetslösning genom spädning av EnVision FLEX Target Retrieval Solution (50x) koncentrat 1:50 i destillerat eller avjoniserat vatten.
2. Fyll PT Link-tankar med tillräcklig mängd (1,5 L) arbetslösning för att täcka vävnadssnitten.
3. Ställ in PT Link att förvärma lösningen till 65 °C.
4. Avparaffinera och rehydrera vävnadssnitten som monterats på objektglasen manuellt. För bättre adhesion av vävnaden till objektglaset rekommenderas att man använder belagda eller
silaniserade objektglas.
5. Sänk ned de rumstempererade vävnadssnitten i den förvärmda EnVision FLEX Target Retrieval Solution (arbetslösningen) och inkubera i 20–40 minuter vid 97 °C. Den optimala inkubationstiden skall bestämmas av användaren.
6. Låt snitten svalna i PT Link till 65 °C.
7. Ta bort varje objektglasställ från PT Link-tanken och sänk med en gång ned objektglasen i ett kärl/en tank (t.ex. PT Link Rinse Station, kod PT109) med utspädd, rumstempererad EnVision FLEX Wash Buffer (20x).
8. Låt objektglasen ligga i den utspädda, rumstempererade EnVision FLEX Wash Buffer (20x), i 1–5 minuter.
9. Placera objektglasen på ett Dako Autostainer/Autostainer Plus-instrument och fortsätt med färgningen. Låt inte snitten torka under behandlingen eller under den påföljande
immunhistokemiska färgningsproceduren.
10. Efter färgning skall objektglasen monteras med ett vattenbaserat eller permanent monteringsmedium.
OBS! När den används i PT Link för HIER-proceduren kan den spädda Target Retrieval Solution och utspädda Wash Buffer användas 3 gånger inom en 5-dagarsperiod om den förvaras i
rumstemperatur.
HIER-procedur med Coplin-kärl:
Efter avparaffinering och hydrering till buffert (vatten), måste de flesta vävnadssnitt utsättas för värmeinducerad epitopåtervinning (HIER):
1. Placera färgningskärlen med utspädd EnVision™ FLEX Target Retrieval Solution (50x) i vattenbad.
2. Värm upp vattenbadet och kärlen fyllda med EnVision™ FLEX Target Retrieval Solution (arbetslösning) till 95–99 °C. Täck kärlen med lock för att stabilisera temperaturen och undvika förångning.
3. Sänk ned de rumstempererade snitten i den förvärmda EnVision FLEX Epitope Retrieval Solution (arbetslösning) i färgningskärlen.
4. Återställ temperaturen på vattenbadet och EnVision™ FLEX Target Retrieval Solution till 95–99 °C.
Inkubera i 20 (±1) minuter vid 95–99 °C.
5. Avlägsna hela kärlet med objektglas från vattenbadet. Låt objektglasen svalna i EnVision™ FLEX Target Retrieval Solution i 20 (±1) minuter vid rumstemperatur.
6. Dekantera EnVision™ FLEX Target Retrieval Solution och skölj snitten med utspädd, rumstempererad EnVision™ FLEX Wash Buffer (20x) i 1–5 minuter.
7. Placera stället med de sköljda snitten i ett Dako Autostainer/Autostainer Plus-instrument. Börja omedelbart den förprogrammerade färgningskörningen.
OBS! När de används i Coplin-kärl för HIER-procedur kan den spädda Target Retrieval Solution och den spädda Wash Buffer endast användas en (1) gång (engångsbruk).
Vissa epitoper tolererar inte HIER och vissa kräver enzymatisk förbehandling. Se produktbladet för den individuella Dako primära antikroppen.
Låt inte vävnadssnitten torka under behandlingen eller under den påföljande immunhistokemiska färgningsproceduren. För bättre vidhäftning av vävnadssnitten till objektglasen rekommenderas användning av FLEX IHC Microscope Slides (kod K8020).
B. Färgningsprocedur
Dako FLEX Ready-to-Use Primary Antibodies kan användas med Dako EnVision™ FLEX+
detektionssystem, applicerat på formalinfixerade, paraffininbäddade snitt.
En spädningsriktlinje för Dako koncentrerade primära antikroppar finns i produktbladet för den koncentrerade primära antikroppen.
De koncentrerade primära antikropparna bör spädas i EnVision™ FLEX Antibody Diluent (DM830, kod K8006).
Färgningsstegen och inkuberingstiderna är förprogrammerade i programvaran för Dako Autostainer/Autostainer Plus-instrument, med användning av följande protokoll:
Protokollmall: FLEX_200 (200 µL dispenseringsvolym) eller FLEX_300 (300 µL dispenseringsvolym) Autoprogram för färgningskörningar:
FLEX (FLEX-protokoll)
FLEX_Mo (FLEX+ Mouse (LINKER)-protokoll)
FLEX_Rb (FLEX+ Rabbit (LINKER)-protokoll)
Steget ”hjälpmedel” (auxiliary) skall ställas in på ”sköljbuffert” (rinse buffer) i färgningskörningar med 10 eller färre objektglas. För färgningskörningar med mer än 10 objektglas skall steget ”hjälpmedel” ställas in på ”inget”. Detta säkerställer jämförbara tvättider.
Alla inkubationssteg skall utföras vid rumstemperatur. Se användarhandboken för det avsedda
instrumentet för ytterligare detaljer. Kontakta Dako Teknisk Service om protokollen inte finns tillgängliga på Dako Autostainer/Autostainer Plus-instrumentet som används. Optimala inkuberingstider för primär antikropp och EnVision™ FLEX/HRP beror på den applicerade primära antikroppen. Se produktbladet för den individuella Dako primära antikroppen. Användaren måste verifiera det applicerade protokollet.
När färgningsproceduren är fullbordad måste proverna monteras. För vattenhaltig montering rekommenderas monteringsmedia såsom Dako Glycergel™ Mounting Medium, kod C0563 eller Faramount Aqueous Mounting Medium, kod S3025.
Kvalitetskontroll
Varje färgningskörning skall innefatta ett känt positivt kontrollprov för att säkerställa korrekt prestanda för alla använda reagenser. Om de positiva kontrollproverna inte uppvisar lämplig positiv färgning, skall märkningen av testproven anses ogiltiga.
Ett negativt kontrollreagens skall användas med varje prov för att identifiera eventuell icke-specifik färgning. Om icke-specifik färgning inte tydligt kan differentieras från den specifika färgningen, skall märkningen av testproven anses ogiltig.
Resultattolkning
Substrate Working Solution innehållande diaminobensidin, ger en brun färg vid målantigenplatsen, som känns igen av den primära antikroppen. Den bruna färgen skall vara närvarande på det positiva
kontrollprovet vid den förväntade lokaliseringen av målantigenen. Om icke-specifik färgning är
närvarande, kommer detta att observeras som en diffus, brunfärgning på objektglasen som behandlats med det negativa kontrollreagenset. Kärnor kommer att färgas blåa av hematoxylin-motfärgen.
Begränsningar
1. Endast för automatisk användning med Dako Autostainer-instrument. Vid utförande av manuella färgningar måste den optimala proceduren fastställas och verifieras av användaren, om detta inte specificerats i produktbladet för den specifika Dako primära antikroppen
2. Endast för användning på formalinfixerade, paraffininbäddade vävnadssnitt. Vid användning av frysta snitt eller cellutstryk, måste den optimala proceduren fastställas och verifieras av
användaren, om detta inte specificerats i produktbladet för den specifika Dako primära antikroppen. Ändringar av proceduren kan ha påverkat antalet tester som medföljer satsen.
Förklaring av symboler
Katalo gnu mme r Te mp era tu rbeg ränsn ing Anvä nd före
Fa ropi ktog ram enl igt GHS (se avsn itte t för för si kti ghe tså tg ärde r)
In vi tro d iag nostisk me di cinsk ap para t
In neh åll er ti llrä cklig t för <n>
te ste r Till verkare
Läs bru ksanvi snin gen Batchkod Faro piktogra m e nli gt
GHS (se avsni ttet fö r försiktig hetsåtgä rder)
Dako EnVision™ Systems täcks av amerikanskt patent 5,543,332 och europeiskt patent 594,772.
Tillverkat av:
Dako Denmark A/S Produktionsvej 42 DK-2600 Glostrup Denmark
Tel. +45 44 85 95 00 Fax +45 44 85 95 95
