FRET-baserad analys för kvantifiering av syntetiska och nativa lipidvesiklar

Examensarbete, 15 hp

Biomedicinsk analytikerprogrammet, 180 hp VT 2019

FRET-baserad analys för

kvantifiering av syntetiska och

nativa lipidvesiklar

Institutionen för Klinisk mikrobiologi Biomedicinsk analytikerprogrammet

Examensarbete, 15 hp

Kursansvarig: Ylva Hedberg Fransson

ylva.hedberg.fransson@umu.se

Läraropponent:

Mattias Forsell

Mari Norgren

2019 06 18

A FRET Based Assay for the Quantification of Synthetic and Native Lipid Vesicles

Handledare

Nyckelord

Lipider, Vesiklar, Sonikering, FRET, Material

3

Abstrakt

Syntetiska och nativa extracellulära vesiklar (EVs) är ett intressant område för forskning.

Cellsekreterade extracellulära vesiklar är involverade i cancerspridning. Syntetiska liposomer har likheter med biologiska celler och är lämpliga för att transportera in läkemedel i människokroppen. Nyligen har en forskargrupp utvecklat en metod baserad på Fluorescens Resonans Energiöverföring (FRET) för att kvantifiera den totala mängden lipidmaterial som finns i provet med liposom innehåll. Syftet med studien var att optimera metoden och bestämma den minimala koncentrationen av

syntetiska fluoroformarkerade vesiklar (FRET-vesiklar) för att kvantifiera lipid innehållande partiklar. I studien användes FRET-vesiklar märkta med ett fluoroforpar NBD-PE/Rhodamin-PE,

lipidinnehållande prov (POPC-lipider) och Herpes simplex virus-1 (HSV-1). FRET-vesiklar blandades med POPC-lipider och membranfusion inducerades genom sonikering. Förändring i FRET-fluorescens mättes med en spektrofluorometer. Minimala koncentrationer av FRET-vesiklar bestämdes i

förhållande till kalibreringskurvor erhållna från standardprov. Ytområdets koncentration (SAC, nm2_{/mL) hos virus bestämdes med kalibreringskurva erhållen från medelvärdet av triplikatmätning}