/05 1/16 [SE]

(1)

1/16 [SE]

Pastorex Meningitis 25

61607 61611 61616

61608 61613 61618

61610 61614

Agglutinationstest för manuell kvalitativ detektion av lösliga antigener av Neisseria meningitidis i grupperna A, C, Y/W135 och B/E. coli K1; Haemophilus influenzae typ b, Streptococcus pneumoniae och Streptococcus grupp B i cerebrospinalvätska och blododlingar; samt för identifiering av Neisseria meningitidis i grupperna A, C och B/E. coli K1; Haemophilus influenzae typ b, Streptococcus pneumoniae och Streptococcus grupp B från isolerade kolonier på agarodlingsmedier.

16008552 - 2020/05

Ändringar av föregående version är gråskuggade.

En gråtonad stycketitel indikerar betydande förändringar i styckets innehåll, läs noga.

(2)

2/16 [SE]

INNEHÅLLSFÖRTECKNING

1. AVSEDD ANVÄNDNING ... 3

2. SAMMANFATTNING OCH FÖRKLARING AV TESTET ... 3

3. TESTPRINCIPER ... 3

4. REAGENSER ... 3

5. VARNING OCH FÖRSIKTIGHETSÅTGÄRDER ... 5

6. PROVER ... 6

7. METOD ... 6

8. TESTBEGRÄNSNINGAR ... 8

9. PRESTANDAEGENSKAPER... 9

10. BIBLIOGRAFISKA REFERENSER ... 13

(3)

3/16 [SE]

1. AVSEDD ANVÄNDNING

Pastorex Meningitis-analysen är ett manuellt kvalitativt agglutinationstest som är avsett för snabb diagnos av bakteriell hjärnhinneinflammation hos misstänkta patienter med kliniska symtom som feber, huvudvärk, nackstyvhet, ändrad medvetandegrad eller andra tecken på hjärnhinneinflammation.

Pastorex Meningitis-analysen används som ett hjälpmedel för diagnos av bakteriell hjärnhinneinflammation genom detektion av lösliga antigener till Neisseria meningitidis i grupperna A, B/E. coli K1, C, Y/W135, Haemophilus influenzae typ b, Streptococcus pneumoniae och Streptococcus grupp B, i cerebrospinalvätska (CSF) och blododlingar.

Pastorex Meningitis-analysen används också för att diagnostisera bakteriell hjärnhinneinflammation genom identifiering av dessa bakteriestammar (förutom Nm-grupp Y/W135) från misstänkta kolonier isolerade på agarodlingsmedier.

2. SAMMANFATTNING OCH FÖRKLARING AV TESTET

Trots de framsteg som uppnåtts inom diagnos och behandling av infektionerna förblir bakteriell hjärnhinneinflammation en stor orsak till dödlighet och morbiditet. En snabb och exakt diagnos av den etiologiska agensen är viktig för den medicinska vården och för genomförandet av lämplig behandling [1, 2, 3, 4].

Streptococcus pneumoniae, Neisseria meningitidis och Haemophilus influenzae b har rapporterats vara de huvudsakliga orsakande organismerna till bakteriell hjärnhinneinflammation [1, 5]. Streptococcus grupp B [6] och Escherichia coli K1 [7, 8] är de huvudsakliga bakteriepatogenerna ansvariga för hjärnhinneinflammation hos nyfödda och för tidigt födda barn.

Polysackaridantigenen som är specifik för N. meningitidis grupp B är identiskt med ett polysackaridantigen som finns hos E. coli K1, vilket sedan möjliggör diagnos av E. coli meningit hos nyfödda, varav cirka 80 % är av K1-stammen [7].

Streptococcus pneumoniae [8] och Neisseria meningitidis är de huvudsakliga patogenerna hos barn och vuxna. Infektioner på grund av Haemophilus influenzae b är nästintill obefintliga i Europa sedan införandet av systematisk vaccination [3].

En tidig diagnos möjliggör snabb behandling och genomförande av förebyggande åtgärder [10, 11]. Den viktigaste undersökningen är fortfarande CSF-analysen [11]. Gramfärgning identifierar bakterier i 50 till 80 % av fallen och odlingen är positiv i cirka 80 % av CSF-proven. Men vid tidig behandling är känsligheten hos dessa två tester lägre än 50 % [3, 4].

Den konventionella tekniken för bakteriell identifiering genom odling är visserligen nödvändig för känslighetstestning och bekräftelse av diagnos, men den kräver 18–24 timmar, vilket är otillräckligt för akutvården. Dessutom kan falska negativa resultat uppstå om provet har transporterats och lagrats under otillfredsställande förhållanden, eller om en antibiotikabehandling inletts innan provtagning [10, 11, 12].

Således möjliggör immunologiska tekniker, såsom latexpartikelagglutinationstekniker för att detektera lösliga antigener som frigörs av de orsakande organismerna i biologiska vätskor, en snabbare diagnos, särskilt i CSF under infektion [13, 14]. Pastorex Meningitis-analysen är ett enkelt test som kräver grundläggande laboratorieutrustning och är enkelt att utföra, vilket gör det möjligt att upptäcka serogrupper av bakterier som är ansvariga för hjärnhinneinflammation inom bara några minuter [1, 15, 16, 17]. Det har påvisats vara praktiskt vid utbrott, för att bestämma vilket vaccin som är lämpligt att ordinera [11, 14, 15, 16, 17, 18].

3. TESTPRINCIPER

Pastorex Meningitis-analysen är baserad på latexpartikelagglutination med visuell tolkning. Polysackaridantigener som är specifika för de bakterier som är ansvariga för hjärnhinneinflammation detekteras med färgade latexpartiklar belagda med stamspecifika antikroppar.

Reaktion vid förekomst av dessa specifika antigener resulterar i synliga färgade klumpar av latexpartiklar. Vid frånvaro av antigener förblir latexpartiklarna i en homogen suspension.

4. REAGENSER 4.1. Beskrivning

A) Pastorex Meningitis-kit, katalognummer 61607 (25 tester):

Identifiering Beskrivning Presentation/förberedelse

R1 N. meningitidis B/E. coli K1 Latex

Röd latex-suspension sensibiliserad med musmonoklonal antikropp som är specifik för N.

meningitidis grupp B/E. coli K1

Konserveringsmedel: 0,3 % ProClin 300 och 0,005 % gentamicinsulfat

0,40 ml

1 droppflaska med vitt lock, färdig att använda

R2 N. meningitidis B/E. coli K1 Negative control

Latex

Röd latex-suspension sensibiliserad med musmonoklonal antikropp specifik för tetanustoxoid

0,40 ml

1 droppflaska med transparent lock, färdig att använda

R3 H. influenzae b Latex

Vit latex-suspension sensibiliserad med kaninantikroppar specifika för H. influenzae b Konserveringsmedel: 0,3 % ProClin 300 och 0,005 % gentamicinsulfat

0,40 ml

1 droppflaska med orange lock, färdig att använda

(4)

4/16 [SE]

R4 S. pneumoniae Latex

Grön latex-suspension sensibiliserad med kaninantikroppar specifika för S. pneumoniae Konserveringsmedel: 0,3 % ProClin 300 och 0,005 % gentamicinsulfat

0,40 ml

1 droppflaska med grönt lock, färdig att använda

R5 Streptococcus B Latex

Gul latex-suspension sensibiliserad med kaninantikroppar specifika för Streptococcus grupp B

0,40 ml

1 droppflaska med gult lock, färdig att använda

R6 N. meningitidis A Latex

Blå latex-suspension sensibiliserad med kaninantikroppar specifika för N. meningitidis grupp A

0,40 ml

1 droppflaska med blått lock, färdig att använda

R7 N. meningitidis C Latex

Röd latex-suspension sensibiliserad med kaninantikroppar specifika för N. meningitidis grupp C

0,40 ml

1 droppflaska med rött lock, färdig att använda

R8 N. meningitidis Y/W135 Latex

Rosa latex-suspension sensibiliserad med kaninantikroppar specifika för N. meningitidis Y/W135

Konserveringsmedel: 0,3 % ProClin 300 och 0,005 % gentamicinsulfat

0,40 ml

1 droppflaska med lila lock, färdig att använda

R9 Negative polyvalent control Latex

Lila latex-suspension sensibiliserad med IgG- immunglobuliner från icke-immuniserad kanin Konserveringsmedel: 0,3 % ProClin 300 och 0,005 % gentamicinsulfat

0,40 ml

1 droppflaska med transparent lock, färdig att använda

R10 Positive polyvalent control Antigenic extract

Antigent extrakt innehållande polysackaridantigenerna från N. meningitidis A,

C, B, Y/W135,

H. influenzae b, Streptococcus grupp B och S. pneumoniae. Konserveringsmedel: 0,01 % Bronidox

1 flaska frystorkat antigenextrakt som ska beredas med 1,0 ml sterilt

vatten (volym som räcker till 18 reaktioner)

- Agglutinationskort för engångsbruk (9 cirklar, var

och en identifierad för sin latexreagens) 30 kort

- Engångsstavar för omrörning 3 x 100 stavar

B) Pastorex Meningitis, enskilda latextester (25 tester vardera):

Katalogn

ummer Identifiering Beskrivning Presentation/förberedelse

61611 R1 N. meningitidis B/E. coli K1 Latex

Röd latex-suspension sensibiliserad med musmonoklonal antikropp specifik för N.

meningitidis grupp B/E. coli K1

Konserveringsmedel: 0,3 % ProClin 300 och 0,005 % gentamicinsulfat

0,40 ml x 1 droppflaska med vitt lock / färdig att använda

61616 R3 H. influenzae b Latex

Vit latex-suspension sensibiliserad med kaninantikroppar specifika för H. influenzae b Konserveringsmedel: 0,3 % ProClin 300 och 0,005 % gentamicinsulfat

0,40 ml x 1 droppflaska med orange lock / färdig att använda

61614 R4 S. pneumoniae Latex

Grön latex-suspension sensibiliserad med kaninantikroppar specifika för S. pneumoniae Konserveringsmedel: 0,3 % ProClin 300 och 0,005 % gentamicinsulfat

0,40 ml x 1 droppflaska med grönt lock / färdig att använda

61613 R5 Streptococcus B Latex

Gul latex-suspension sensibiliserad med kaninantikroppar specifika för Streptococcus grupp B

0,40 ml x 1 droppflaska med gult lock / färdig att använda

61608 R6 N. meningitidis A Latex

Blå latex-suspension sensibiliserad med kaninantikroppar specifika för N. meningitidis grupp A

0,40 ml x 1 droppflaska med blått lock / färdig att använda

(5)

5/16 [SE]

C) Pastorex Meningitis kontrollkit, katalognummer 61618, för enkelt latextest (för 2 x 25 tester):

R2 N. meningitidis B/E. coli K1 Negative control

Latex

Röd latex-suspension sensibiliserad med musmonoklonal antikropp specifik för tetanustoxoid

2 x 0,40 ml

2 droppflaskor med transparent lock,

färdiga att använda

R9 Negative polyvalent control Latex

Lila latex-suspension sensibiliserad med IgG- immunglobuliner från icke-immuniserad kanin Konserveringsmedel: 0,3 % ProClin 300 och 0,005 % gentamicinsulfat

2 x 0,40 ml

2 droppflaskor med transparent lock,

färdiga att använda

R10 Positive polyvalent control Antigenic extract

Antigenextrakt som innehåller polysackaridantigenerna för N. meningitidis A, C,

B, Y/W135,

H. influenzae b, Streptococcus B, och S. pneumoniae. Konserveringsmedel: 0,01%

Bronidox

2 flaskor frystorkat antigenextrakt som ska beredas med 1,0 ml sterilt vatten (volym som räcker till 18 reaktioner)

- Agglutinationskort för engångsbruk (9 cirklar, var

och en identifierad för sin latexreagens) 2 x 20 kort

- Engångsstavar för omrörning 2 x 100 stavar

4.2. Krav på förvaring och hantering

• Reagenser kan användas fram till det utgångsdatum som står på förpackningen efter att de öppnats.)

• LATEXREAGENSER FÅR EJ FRYSAS.

• Se till att locken till droppflaskorna sitter ordentligt tätt, för att undvika att reagenserna kontamineras eller torkar.

• Flaskorna med latexreagenser ska förvaras upprätt (inuti originalskumplasten i kittet).

Identifiering Stabilitet

R1, R2, R3, R4, R5, R6, R7, R8, R9 Efter att förpackningen öppnats: till bäst-före-datumet som står på förpackningen vid +2–

8 °C.

R10 Efter rekonstituering: 1 månad vid +2–8 °C; eller till utgångsdatum när den är fryst i -20 °C (frys inte på nytt efter upptining)

5. VARNING OCH FÖRSIKTIGHETSÅTGÄRDER

För in vitro-diagnostisk användning av professionell användare i laboratoriemiljö

5.1. Försiktighetsåtgärder för hälsa och säkerhet

• Detta testkit bör bara hanteras av behörig personal som är utbildad i laboratorieprocesser och bekanta med eventuella risker. Bär lämpliga skyddskläder, handskar och ögon-/ansiktsskydd och agera korrekt enligt gällande god laboratoriesed.

• Biologiskt spill: spill av material av humant ursprung ska betraktas som potentiellt smittsamt.

Spill som inte innehåller syror ska dekontamineras omedelbart med lämpligt kemiskt desinfektionsmedel som är effektivt mot de potentiella biologiska risker som proverna utgör. Vanligen betyder det att spillet, området och eventuella kontaminerade ytor eller utrustningsdelar torkas av med en blandning på 1:10 av blekmedel, 70–80 % etanol eller isopropanol, en jodofor (t.ex. 0,5 % Wescodyne Plus) och sedan torkas av.

Spill som innehåller syra ska absorberas (torkas upp) eller neutraliseras, området spolas med vatten och torkas av.

Material som används för att absorbera spill bör hanteras som biologiskt avfall. Området ska sedan dekontamineras med ett kemiskt desinfektionsmedel.

OBS! Placera inte lösningar som innehåller blekmedel i autoklaven!

• Kassera alla prover och material som används för att utföra testet som om de innehöll ett smittsamt ämne.

Laboratorieavfall, kemiskt avfall eller biologiskt riskavfall måste hanteras och kasseras i enlighet med alla lokala, regionala och nationella förordningar.

• För risk- och skyddsrekommendationer i samband med vissa kemikaliekomponenter i detta testkit, se de bildsymboler som anges på etiketterna och informationen som tillhandahålls i slutet av bruksanvisningen. Säkerhetsdatabladet finns på www.biorad.com.

61610 R7 N. meningitidis C Latex

Röd latex-suspension sensibiliserad med kaninantikroppar specifika för N. meningitidis grupp C

0,40 ml x 1 droppflaska med rött lock / färdig att använda

(6)

6/16 [SE]

5.2. Försiktighetsåtgärder i samband med proceduren

5.2.1. Förberedelse

• Använd inte kittet om någon av komponenternas förpackning är skadad.

• Använd inte utgångna reagenser.

• Blanda inte reagenser från olika partier i samma analysomgång.

• Vänta i 10 minuter innan reagenserna används, så att de når rumstemperatur (18–30 °C).

• Vidrör inte reaktionsytan på agglutinationskorten.

• R10-reagensen ska rekonstitueras med destillerat sterilt vatten för att undvika kontaminering.

• Det rekommenderas att rangordna latexreagenserna enligt kortdistributionsmönstret innan proceduren påbörjas.

• Vid användning av en standardmässig laboratorieorbitalrotator som skiljer sig från exemplet som nämns i §7.2 måste den optimala hastigheten justeras noggrant med R10-reagensen för att säkerställa homogen agglutination på hela cirkelns yta. Manuell omrörning rekommenderas inte.

• Undvik torkning av reagenser som ansamlats på agglutinationskortet/korten under rotationstiden och se till att orbitalrotatorn inte placeras under ett luftkonditioneringsflöde.

• Vid användning av ett vattenbad för att värma CSF-proverna i 100 °C eller en torrinkubator, se till att 100 °C uppnås inuti röret.

• Använd endast plaststavarna för omrörning som tillhandahålls i kittet eller en ögla för att blanda reagenser med prover eller bakteriekolonier.

5.2.2. Bearbetning

• Ändra inte analysproceduren.

• Vidrör inte reaktionsytan på agglutinationskorten.

• Utför testet i rumstemperatur (mellan 18–30 °C), undvik placering under luftkonditioneringsflöde.

• För att värma upp CSF-proverna i 100 °C är användning av en torrinkubator att föredra. Använd vattentäta rör om proven upphettas i vattenbad, så att inget vatten kommer in i rören.

• Se till att CSF-prover som är uppvärmda till 100 °C återgår till rumstemperatur före testning.

• Skaka reagenserna försiktigt före varje användning. Kontrollera sedan att latexsuspensionen förblir homogen före användning.

• För korrekt droppflöde ska droppflaskorna med reagens alltid hållas i vertikalt läge.

• Torka av spetsen på reagensen så att droppet blir väl kalibrerat.

• Använd en ny omrörningsstav för varje reaktion.

6. PROVER

• Cerebrospinalvätskeprover: CSF-prover bör behandlas så snart som möjligt efter insamling. Om detta inte är möjligt kan de lagras i upp till fyra timmar mellan +2 och +8 °C. Bakteriologiska undersökningar (odling) bör prioriteras för att undvika kontaminering av provet. Den minimala provvolymen för testning med Pastorex Meningitis-analysen är 500 µl.

Ingen interferens har påvisats i CSF-prover som innehåller onormal nivå av hemoglobinkoncentration (upp till 2 mg/ml för att efterlikna hemolys).

• Positiv blododling: Prover ska behandlas omedelbart. Eftersom det finns en stor mängd olika blododlingsmedier kan resultaten inte garanteras för alla medier (jfr Testbegränsning c).

• Bakteriell gruppering från isolerade kolonier: Testet måste utföras med färska och väl isolerade kolonier på agarodlingsmedier (jfr Testbegränsningar c och d).

7. METOD

7.1. Nödvändigt material

7.1.1. Material som tillhandahålls

• Allt material listat under ”Reagenser” och deras kontroller

• Agglutinationskort för engångsbruk

• Engångsstavar för omrörning

7.1.2. Material som behövs men som ej ingår

• Standardmikropipett för distribution av 30 och 50 µl

• Kalibrerade öglor 1 µl och 5 µl för bakteriell gruppering

• Sterilt destillerat vatten

• Sterilt fysiologiskt vatten

• Todd Hewitt-buljong (Bio-Rad, katalognummer 55704)

• Antiserum Neisseria meningitidis Y, W135, 29E kit (Bio-Rad, katalognummer 58704)

• Vattentäta rör

• Torrinkubator eller kokande vattenbad, 100 °C, för CSF-analysförfarandet

• Vattenbad 37 °C

• Rotator av orbitaltyp (dvs. hastighet 120 varv per minut med IKA-modell KS260 basic)

• Centrifug för mikrorör

(7)

7/16 [SE]

• Timer

• Desinfektionsbad

7.2. Analysprocedur

7.2.1. Cerebrospinalvätska

Provberedning

• Centrifugera cerebrospinalvätskan i fem minuter vid 350 g om den är mycket grumlig eller innehåller röda blodkroppar.

Samla upp supernatanten.

• Värm upp alla CSF-prover i 3 minuter i 100 °C. Se till att proverna når rumstemperatur (18–30 °C) och utför sedan centrifugering i 5 minuter vid 3 000 g.

Testförfarande

• Dosera 50 µl av den beredda provsupernatanten i varje cirkel på agglutinationskortet.

• Skaka latexreagenserna försiktigt.

• Håll flaskan upprätt och placera en droppe av varje latexreagens på engångskortet enligt fördelningsmönstret: R9, R6, R7, R1 och R2 i de vita cirklarna och R8, R3, R4 och R5 i de svarta cirklarna.

• Blanda latexreagenserna och provet med en stav på hela cirkelytan. Byt stav mellan varje latexreagens.

• Rotera kortet försiktigt horisontellt på rotatorn av orbitaltyp (jfr §5.2.1.) i högst 10 minuter.

• Observera om någon agglutination syns med blotta ögat inom max. 10 minuter. Vänta till slutet av dessa 10 minuter för att fastställa ett negativt resultat.

7.2.2. Blododling

Förberedelse

• Kontrollera den bakteriella morfologin och gramfärgningen för att få en presumtiv bakteriell orientering.

• Ta 1 till 2 ml positivt blododlingsprov.

• Centrifugera i fem minuter vid 2 000 g.

Testförfarande

• Dispensera 50 µl supernatant i varje cirkel på engångskortet, motsvarande latexreagenserna som ska testas, enligt gramfärgningen.

• Skaka försiktigt latexreagenserna som valts för testet.

• Håll droppflaskan upprätt och applicera en droppe av varje vald latexreagens på engångskortet.

• Blanda latexreagenserna och provet med en stav på hela cirkelytan. Byt stav mellan varje latexreagens. Rotera kortet försiktigt horisontellt på rotatorn av orbitaltyp (jfr §5.2.1.) i max. 5 minuter.

• Observera om någon agglutination syns med blotta ögat inom max. 5 minuter. Vänta till slutet av dessa 5 minuter för att fastställa ett negativt resultat.

7.2.3. Grupperingsförfarande för isolerade bakteriestammar

Innan du utför testet, kontrollera morfologin och gramfärgningen för att få en presumtiv bakteriell orientering:

Gram och morfologi Orienteringstest Presumptiv bakterieidentifiering

Gramnegativa bakterier Oxidastest (+): Neisseria meningitidis, Haemophilus influenzae b (-): Escherichia coli K1

Grampositiva kocker Katalastest (+): Testa inte dessa kolonier

(-): Streptococcus pneumoniae*, Streptococcus grupp B

* Icke-inkapslade S. pneumoniae-stammar kan inte identifieras med immunagglutinationslatex [8].

a) N. meningitidis (endast grupperna A, B och C), H. influenzae b, E. coli K1, S. pneumoniae

N. meningitidis Y/W135 latexreagens (R8) kan inte användas för gruppering av bakteriestammar (jfr Testbegränsning f).

• Dosera 30 µl steril fysiologisk lösning i cirkeln/cirklarna på engångskortet.

• Provberedning:

- N. meningitidis, H. influenzae b och E. coli K1: motsvarande 1 µl ögla, vilket motsvarar 2 till 3 kolonier.

- S. pneumoniae: motsvarande 5 µl ögla, vilket motsvarar minst 10 till 12 kolonier.

• Emulgera försiktigt de kolonier som provats med öglan så att en homogen suspension bildas.

• Skaka försiktigt de R1-, R3-, R4-, R6- eller R7-latexreagens(er) som valts för identifiering. Håll droppflaskan (flaskorna) upprätt och placera en droppe av reagensen/reagenserna i utkanten av bakteriesuspensionen på engångskortet.

• Blanda latexdroppen och provsuspensionen med en stav.

• Vrid kortet försiktigt horisontellt på rotatorn av orbitaltyp (jfr §5.2.1.), i max. 2 minuter.

• Observera om någon agglutination syns med blotta ögat inom max. 2 minuter. Vänta till slutet av dessa 2 minuter för att fastställa ett negativt resultat.

• Bekräfta identifieringen av bakteriearterna med konventionella biokemiska test.

b) Streptococcus grupp B (ß-hemolytiska kolonier)

• Suspendera 7 till 8 kolonier i 3 ml av en Todd Hewitt-buljong (Bio-Rad, katalognummer 55704) med en 5 µl ögla.

• Inkubera i vattenbad i 37 °C i två till tre timmar.

(8)

8/16 [SE]

• Centrifugera i 5 minuter vid 3 000 g.

• Dispensera 50 µl supernatant i motsvarande cirkel på engångskortet.

• Skaka försiktigt R5-reagensen; håll flaskan upprätt och applicera en droppe i utkanten av bakteriesuspensionen.

• Blanda droppen latex och provet med en stav på hela cirkelytan.

• Vrid kortet försiktigt horisontellt på rotatorn av orbitaltyp (jfr §5.2.1.), i max. 1 minut.

• Observera om någon agglutination syns med blotta ögat inom max. 1 minut.

• Bekräfta identifieringen av arterna med hjälp av konventionella biokemiska tester.

7.3. Kvalitetskontroll

Latexreagenserna bör vara helt homogena efter omskakning.

• Dispensera 1 droppe (50 µl) av R10 (positiv polyvalent kontrollatex) i varje cirkel på engångskortet.

• Skaka latexreagenserna försiktigt. Håll droppflaskorna upprätt och placera en droppe av varje latexreagens på engångskortet enligt fördelningsmönstret: R9-, R6-, R7-, R1- och R2-reagenser i de vita cirklarna och R8-, R3-, R4- och R5-reagenser i de svarta cirklarna.

• Blanda latexreagenserna och R10-reagensen med en stav; byt stav för varje latexreagens.

• Vrid kortet försiktigt i 10 minuter (jfr §5.2.1.). Kontrollera under dessa 10 minuter med blotta ögat om någon agglutination framträder (jämför reaktionerna med testlatex med de negativa latexkontrollerna).

• Intensiteten i agglutinationen och den tid det tar innan den framträder beror på antigen-/antikroppsaviditet. Därför är de observerade reaktionerna variabla för varje latexreagens. N. meningitidis B/E. coli K1 Latex (R1)-reaktionerna är finare än de andra.

• Ett sterilt fysiologiskt vatten kontrollerar frånvaron av ospecifik agglutination av varje latexreagens. För att utföra detta kvalitetskontrolltest används sterilt fysiologiskt vatten enligt proceduren för positiv polyvalent kontrollatex ovan.

• Latexreagenserna ska inte användas när de inte agglutinerar med R10-reagensen eller när de agglutinerar icke- specifikt med sterilt fysiologiskt vatten (detta kan bero på felaktig förvaring av kittet eller kontaminering av en latexreagens).

7.4. Tolkning av resultaten

Positiv reaktion

En positiv reaktion indikeras av fin agglutination som syns med blotta ögat, till skillnad från negativ kontrollatex R2 och R9.

Intensiteten i agglutinationen och den tid det tar innan den framträder beror på antigenkoncentrationen i det prov som testats.

En diskrepans mellan ett positivt antigentest och en negativ odling kan förklaras av frånvaro av livsdugliga bakterier i det odlade provet (antibiotikabehandling som inletts innan proverna togs eller transportförhållanden som inte var anpassade för att ömtåliga bakterier ska överleva).

En positiv reaktion med N. meningitidis B/E.coli K1 latex hos ett nyfött eller för tidigt fött barn tyder vanligtvis på infektion av E.coli K1. För äldre patienter är N. meningitidis B en mer trolig orsak. Provet måste odlas för att diagnosen ska bekräftas.

Negativ reaktion

En negativ reaktion indikeras av en homogen suspension utan klumpar.

Ej tolkningsbara resultat

En reaktion är otydbar om provet agglutinerar med den negativa kontrollatexen (R2- eller R9-reagens) och/eller med mer än en av de latexreagenser som ingår i kittet. I detta fall rekommenderas det att man upprepar testet med ett annat prov och väntar på resultatet från odlingen. Det är mycket ovanligt att en infektion orsakas av två olika bakteriearter.

8. TESTBEGRÄNSNINGAR

a) I många fall möjliggör den immunologiska latextekniken en presumptiv diagnos av organismen. Ibland kan emellertid provets antigenkoncentration understiga detektionsgränsen för latexen och framkalla en negativ reaktion. I dessa fall kan provet upprepas vid ett senare tillfälle.

b) Den här tekniken kan inte ersätta bakterieodling, som är det enda sättet att få ett resultat för antimikrobiell känslighet.

c) Vissa blododlingsmedier kan resultera i icke-specifika reaktioner eller feltolkningar. För att förutse sådana situationer rekommenderas att testa en negativ kontroll, med en blododling som har inokulerats med sterilt blod eller med en annan organism än den som detekteras med Pastorex Meningitis-analysen.

d) Svag agglutination med Pastorex Meningitis har rapporterats med en stam av E. coli K1 isolerad på ett BCP- agarmedium.

e) Ett fåtal exempel på orelaterade bakterier som har liknande antigen har rapporterats.

Möjliga korsreaktioner bör alltid beaktas

[18 till 24].

f) N. meningitidis Y/W135 latexreagens (R8) kan inte användas för gruppering av bakteriestammar isolerade på agarodlingsmedier. För att bestämma dessa grupper rekommenderas användning av konventionella antisera (Bio- Rad Antiserum Neisseria meningitidis Y, W135, 29E kit, katalognummer 58704).

g) Som vid all laboratoriediagnostik, kan den slutgiltiga diagnosen inte baseras på resultatet från ett enda test utan måste göras genom att väga samman kliniska data med biokemiska, cytologiska och immunologiska resultat.

h) Detektering av löslig antigen i blododling, liksom gruppering av stammar som isolerats på agarodlingsmedier, ska kompletteras med en artidentifiering av bakteriestammen.

(9)

9/16 [SE]

9. PRESTANDAEGENSKAPER 9.1

Analytiska prestandaegenskaper

9.1.1 Precisionsmätning

En panel av 2 prover användes för att fastställa reproducerbarheten av och precisionen hos Pastorex Meningitis-analysen.

Precisionspanelen med två medlemmar inkluderade 1 negativ (icke-reaktiv med alla latexreagenser) och 1 multipositiv bestående av sju antigener svagt reaktiva med R1-, R3-, R4-, R5-, R6-, R7- och R8-reagenser och icke-reaktiva med R2- och R9-reagenser.

9.1.1.1 Repeterbarhet

Precisionspanelen (N=2) testades i replikat om 10 på samma dag, på ett parti av Pastorex Meningitis-analysen och avlästes av en användare. Som illustreras i tabell I gav de negativa och positiva paneldeltagarna samma förväntade resultat med alla 10 replikat.

Tabell I: Repeterbarhetsresultat

Repeterbarhet med Pastorex Meningitis-analys Negativ paneldeltagare Multi-positiv paneldeltagare

Latexreagens Stamdetektering Totala

repetitioner Icke-

reaktiva Reaktiva Totala repetitioner

Icke-

reaktiva Reaktiva

R1 N. meningitidis grupp B/E. coli K1 10 10 0 10 0 10

R2 N. meningitidis grupp B/E. coli K1

(negativ kontrollatex) 10 10 0 10 10* 0

R3 H. influenzae b 10 10 0 10 0 10

R4 S. pneumoniae 10 10 0 10 0 10

R5 Streptococcus grupp B 10 10 0 10 0 10

R6 N. meningitidis grupp A 10 10 0 10 0 10

R7 N. meningitidis grupp C 10 10 0 10 0 10

R8 N. meningitidis grupp Y/W135 10 10 0 10 0 10

R9 Negativ polyvalent kontrollatex 10 10 0 10 10* 0

Obs! (*) = Förväntade resultat (R2 och R9 är kontrollatexpärlor)

9.1.1.2 Medelhög precision

Precisionspanelen (N=2) testades i replikat om 20 av två oberoende användare med 2 replikat per dag i 5 dagar. Som illustreras i tabell II gav de negativa och positiva paneldeltagarna samma förväntade resultat med alla 20 replikat.

Tabell II: Precisionsresultat omgång-till-omgång, dag-till-dag och mellan användare Omgångs- och dagsprecision

med Pastorex Meningitis-analys Negativ paneldeltagare Multi-positiv paneldeltagare

Latexreagens Stamdetektering Totala

reaktiva Reaktiva Totala

reaktiva Reaktiva

R1 N. meningitidis grupp B/E. coli K1 20 20 0 20 0 20

R2 N. meningitidis grupp B/E. coli K1

(negativ kontrollatex) 20 20 0 20 20* 0

R3 H. influenzae b 20 20 0 20 0 20

R4 S. pneumoniae 20 20 0 20 0 20

R5 Streptococcus grupp B 20 20 0 20 0 20

R6 N. meningitidis grupp A 20 20 0 20 0 20

R7 N. meningitidis grupp C 20 20 0 20 0 20

R8 N. meningitidis grupp Y/W135 20 20 0 20 0 20

R9 Negativ polyvalent kontrollatex 20 20 0 20 20* 0

Obs! (*) = förväntade resultat (R2- och R9-reagenser är kontrollatexpärlor)

(10)

10/16 [SE]

9.1.1.3 Precision mellan partier

Precisionspanel mellan partier inklusive reaktiva lösliga meningeala antigena lösningar, reaktiva och icke-reaktiva meningealstammar och två icke-reaktiva referenscerebrospinalvätskor testades på tre partier av Pastorex Meningitis- analysen. Som illustreras i tabell III med agglutinationsresultat gav de negativa och positiva paneldeltagarna samma förväntade resultat med de tre partierna.

Tabell III: Resultat för precision mellan partier

Precision mellan partier med Pastorex Meningitis-analys

Agglutinationsintensitet (från 0 till 3)*

Lösliga antigener Stammar panel Referens CSF-1 Referens CSF-2 Latexreag

ens Stamdetektering Parti 1 Parti 2 Parti 3 Parti 1 Parti 2 Parti 3 Parti 1 Parti 2 Parti 3 Parti 1 Parti 2 Parti 3

R1

N. meningitidis grupp B 2,5- 2,5 2,5 3 3 3

0 0 0 0 0 0

E. coli K1 nd 3 3 3

R2

N. meningitidis grupp B/E. coli K1 (negativ kontrollatex)

0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0

R3 H. influenzae b 2,5 3 3 3 3 3 0 0 0 0 0 0

R4 S. pneumoniae**

1,5 2 2

3 3 2,5 0 0 0 0 0 0

3 3 3

R5

Streptococcus grupp B 2,5 2,5 2 3 3 3 0 0 0 0 0 0

Streptococcus grupp A

nd

0 0 0

nd

Streptococcus grupp C 0 0 0

Streptococcus grupp D 0 0 0

Streptococcus grupp F1 0 0 0

Streptococcus grupp G 0 0 0

R6 N. meningitidis grupp A 2 3 3 3 3 3 0 0 0 0 0 0

R7 N. meningitidis grupp C 3- 3 3 3 3 3 0 0 0 0 0 0

R8

N. meningitidis grupp Y 2,5 2,5 3

nd

0 0 0 0 0 0

N. meningitidis grupp W135 1,5 2,5 2,5 0 0 0 0 0 0

R9 Negativ polyvalent kontrollatex nd 0 0 0 0 0 0 0 0 0

Anmärkningar: nd = ej bestämd

(*-) Siffran för agglutinationsintensitet rundades av med 0,5 och suffixet + eller - (t.ex. 2,5+ ligger mellan 2 och 3, men med något större intensitet än 2,5-)

(**) Två olika Streptococcus pneumoniae (03 och 9V) lösliga antigenlösningar har testats med R4-reagenslatex.

9.1.2 Analytisk specificitet Korsreaktioner

Se §9.2.1 Diagnostisk specificitet med blododling eller kolonier från bakteriekultur.

9.1.3 Prozoneffekt

Eventuell förekomst av hookeffekt undersöktes genom att testa negativa artificiella CSF-prover med antigena lösningar vid 100 µg/ml som högtiterprov, med olika spädningar. Överensstämmelsen hos resultaten av outspädda prover och utspädda prover visar att det inte fanns någon hookeffekt i proverna som testades.

(11)

11/16 [SE]

9.2 Kliniska prestandaegenskaper 9.2.1 Diagnostisk specificitet

a. Specificitet med CSF-prover

Maximalt 61 CSF-sterila prover, bekräftat negativa, testades med Pastorex Meningitis-analysen. Alla testade prover var negativa med något av latexreagenserna. Därför, vilket illustreras i tabell IV, är specificiteten för Pastorex Meningitis- analysen 100 %. Några av dessa prover var artificiellt kontaminerade med bakterier som var ansvariga för hjärnhinneinflammation men skilde sig från dem som upptäcktes genom Pastorex Meningitis-analysen utan att påverka specificiteten som förblev 100 %.

Tabell IV: Specificitet med CSF

Specificitet

på CSF Stamdetektering

Sterila CSF-prover CSF-prover

med bakteriell kontaminering Antal

testade

Antal funna Icke- reaktiva

Specificite t (%)

Antal testade

Antal funna Icke-reaktiva

Specificitet (%) R1 N. meningitidis grupp

B/E. coli K1 12 12 100 nd nd Nd

R3 H. influenzae b 61 61 100 32 32 100

R4 S. pneumoniae 60 60 100 39 39 100

R5 Streptococcus grupp B 49 49 100 58 58 100

R6 N. meningitidis grupp A 52 52 100 50 50 100

R7 N. meningitidis grupp C 52 52 100 56 56 100

R8 N. meningitidis grupp

Y/W135 40 40 100 40 40 100

b. Specificitet med kolonier från bakteriekultur

Specificitetsprestanda testad med R1-reagens på 53 stammar tillhörande släktena Neisseria (N=20 med meningitidis grupp A, C, Y, W135 och andra), Branhamella (N=1), Acinetobacter (N=5), Klebsiella (N=6), Streptococcus (N=7 med B, pneumoniae och andra), Haemophilus influenza (N=6), Serratia (N=1 S. marscesens) och Enterobacter aerugenes (N=1), Pseudomonas aeruginosa (N=2), Escherichia coli icke-K1 (N=4) är 90,6 % (48/53), vilket visar viss korsreaktivitet. Som framgår av tabell V erhölls ett falskt positivt resultat med Neisseria flavescens, två falska positiva med Klebsiella pneumoniae och två falskt positiva med Acinetobacter haemolyticus och Acinetobacter baumanii-stammar.

Specificitetsprestanda testad med R3- till R7-reagenser på 330 stammar tillhörande släktena Neisseria (N≤109), Branhamella (N≤5), Acinetobacter (N≤6), Streptococcus (N≤11), Klebsiella (N≤3), Haemophilus (N <10), Escherichia coli (N <1), Moraxella (N <3) och Oligella (N <1) är 100 %.

Tabell V: Specificitet med kolonier från bakteriekultur Specificitet på

kolonier Stamdetektering Antal testade Antal funna Icke

Reaktiva

Specificitet (%)

R1 N. meningitidis grupp B/E. coli K1 53 48 (*) 90,6

R3 H. influenzae b 31 31 100

R4 S. pneumoniae 33 33 100

R5 Streptococcus grupp B 17 17 100

R6 N. meningitidis grupp A 122 122 100

R7 N. meningitidis grupp C 127 127 100

Obs! (*) korsreaktivitet med stammar: Ett falskt positivt resultat erhölls med Neisseria flavescens, två falska positiva med Klebsiella pneumoniae och två falska positiva med Acinetobacter haemolyticus och Acinetobacter baumanii-stammar.

c. Specificitet med blododling

Specificitetsprestanda testad med R1-reagens på 39 blododlingar med identifierade stammar som hör till släktet Acinetobacter (N=2), Candida (N = 1), Klebsiella (N=7), Staphylococcus (N=16), Serratia (N=1) Micrococcus (N = 2), Enterobacter (N=3) och Escherichia coli (N=7) är 97,4 % (38/39), vilket visar mindre korsreaktivitet (ett falskt positivt resultat erhölls med Klebsiella pneumoniae-stammar).

Som visas i tabell VI är specificitetsprestandan testad med R3 till R7-reagens på 37 blododlingsprover 100 %.

(12)

12/16 [SE]

Tabell V: Specificitet med blododling Specificitet

på kolonier Stamdetektering Antal testade Antal funna Icke-

reaktiva

Specificitet (%)

R1 N. meningitidis grupp B/E. coli K1 39 38 (*) 97,4

R3 H. influenzae b 37 37 100

R4 S. pneumoniae 37 37 100

R5 Streptococcus grupp B 37 37 100

R6 N. meningitidis grupp A 37 37 100

R7 N. meningitidis grupp C 37 37 100

Obs! (*) Korsreaktivitet: Ett falskt positivt resultat erhölls med Klebsiella pneumoniae.

9.2.2 Diagnostisk känslighet

a. Känslighet med CSF-prover

Känslighetsprestanda testad på 77 positiva CSF-prover låg på mellan 91,7 % och 100 % enligt latexreagenserna.

Tabell VII: Känslighet med CSF Känslighet

på CSF Stamdetektering Antal testade Antal funna

Reaktiva Känslighet (%)

R1 N. meningitidis grupp B/E. coli K1 3 3 100

R3 H. influenzae b 34 33 97,1

R4 S. pneumoniae 24 22 91,7

b. Känslighet med kolonier från bakteriekultur Känslighetsprestanda testad på 95 stammar är 100 %.

Tabell VIII: Känslighet med kolonier från bakteriekultur Känslighet

på kolonier Stamdetektering Antal testade Antal funna

Reaktiva

Känslighet (%)

R1 N. meningitidis grupp B/E. coli K1 10 (*) 10 100

R3 H. influenzae b 17 17 100

R4 S. pneumoniae 15 15 100

Obs! (*) 10 stammar (9 N. meningitidis och 1 E. coli Kl) testades med R1-latex.

c. Känslighet med blododling

Känslighetsprestanda testad på fyra blododlingsprover med R4 (S. pneumoniae Latex) och R5 (Streptococcus grupp B Latex) reagenser är 100 %.

Tabell IX: Känslighet med blododling Känslighet på

blododling Stamdetektering Antal testade Antal funna

Reaktiva

Känslighet (%)

R4 S. pneumoniae 2 2 100

(13)

13/16 [SE]

9.3 Analytisk känslighet

Analytisk känslighet för Pastorex Meningitis-analysen bestämdes för varje latexreagens genom att använda serieutspädningar av motsvarande meningealantigener med kända koncentrationer tills avsaknad av detektion. Tabell X sammanfattar den lägsta detekterbara koncentrationen som hittats för varje Pastorex latexreagens.

Tabell X: Analytisk känslighet vid Pastorex Meningitis-analys

Latexreagens Stamdetektering Känslighetströskel

(ng/mL)

R1 N. meningitidis grupp B/E. coli K1 62,5

R3 H. influenzae b 0,1

R4 S. pneumoniae 95

R5 Streptococcus grupp B 20

R6 N. meningitidis grupp A 2,5

R7 N. meningitidis grupp C 2,5

R8 N. meningitidis grupp Y 5,0

N. meningitidis grupp W135 2,5

10. BIBLIOGRAFISKA REFERENSER

1. WHO. Meningitis Diagnostics Use Cases. 2019.

2. Denis F., Saulnier M. et Chiron J.P. Diagnostic étiologique rapide des méningites purulentes par agglutination passive indirecte de particules de latex et par contre-immunoélectrophorèse : expérience et perspectives. Bull. O.M.S., 1981, 59, 143-151.

3. ESCMID Guideline: diagnosis and treatment of acute bacterial meningitis. 2016 European Society of Clinical Microbiology and Infectious Diseases. Clin Microbiol Infect 2016; 22: S37-S62.

4. Center for Diseases Control and Prevention. Laboratory Methods for the Diagnosis of Meningitis Caused by Neisseria meningitidis, Streptococcus pneumoniae, and Haemophilus influenzae. Second edition (2011). Chapter 13: Quality Control/Quality Assurance.

5. Systematic review of Rapid Diagnostic Tests for the diagnosis of meningitis in outbreak response in sub-Saharan Africa. Report for WHO Meningitis guideline revision. April 2014.

6. Tessier F. Dépistage et identification des streptocoques du groupe B. Intérêt en périnatologie. Extrait de LABORAMA n°14, oct. 1982, Institut Pasteur Production edit.

7. Kaczmarek A. et al. Detection of K1 antigen of Escherichia coli rods isolated from pregnant women and neonates.

Folia Microbiol. 59:419–422, 2014.

8. Robbins J.B., Mc Cracken G.H. Jr., Gotschlich G.C., Orskov F., Orskov I., Hanson L.A. Escherichia coli K1 capsular polysaccharide associated with neonatal meningitis. New Engl. J. Med. 290, 1216-1220, 1974.

9. Lund E. and Henrichsen J. Laboratory diagnosis, serology and epidemiology of Streptococcus pneumoniae. In Methods in Microbiology, T. Bergan and J.R. Norris edit., 1978, 12, chap. XI, 241-262 (Academic press, London, New-York, San Francisco).

10. Carbonelle E. Apport des examens biologiques dans le diagnostic positif, la détermination de l’étiologie et le suivi d’une méningite suspectée bactérienne. Médecine et maladies infectieuses. 39. 581–605, 2009.

11. Astier-Thefenne et al. Rapid diagnostic test and epidemics of bacterial infectious diseases. Revue francophone des laboratoires - Juillet/Août 2015 - N°474.

12. Chaïbou et al. Streptococcus pneumoniae invasive infections in Burkina Faso, 2007 to 2011.Médecine et maladies infectieuses. 44.117–122, 2014.

13. Leinonen M. and Herva E. The latex agglutination test for the diagnosis of meningococcal and Haemophilus influenzae meningitis. Scand. J. Infect., 9,187-191,1977.

14. Newman R.B., Stevens R.W. and Gaafar H.A. Latex agglutination test for the diagnosis of Haemophilus influenzae meningitis. J. Lab. Clin. Med., 76, 107-113, 1970.

(14)

14/16 [SE]

15. Djibos S. et al. Evaluation of the Pastorex® Meningitis kit for the rapid identification of Neisseria meningitidis serogroups A and W135 (Burkina Faso). Trans. R. Soc. Trop. Med. Hyg. Jun; 100(6):573-8, 2006.

16. Borel et al. - High sensitivity and specificity of the Pastorex® latex agglutination test for Neisseria meningitidis serogroup A during a clinical trial in Niger. 2006.

17. Uadialea K. et al, Evaluation of Pastorex Meningitis kit performance for the rapid identification of Neisseria meningitidis serogroup C in Nigeria. Trans R Soc Trop Med Hyg. 110: 381–385, 2016.

18. Denis F. et Mounier M. Le diagnostic rapide des méningites cérébro-spinales : techniques, résultats, limites et perspectives. Méd. Mal. Infect. 14, 27-36, 1984.

19. Bradshaw M.W., Chneerson R., Parke J.C. Jr., Robbins J.B. Bacterial antigens cross-reactive with the capsular polysaccharide of Haemophilus influenzae type b. Lancet, i (May 29), 1095-1097, 1971.

20. Kasper D.L., Winkelhake J.L., Zollinger W.D., Brandt B.L., and Artenstein M.S. Immunochemical similarity between polysaccharide antigens of Escherichia coli 07:K1 (L): NM and group B Neisseria meningitidis.

J. Immunol. 110, 262-268, 1973.

21. Lee P.C. and Wetherall B.L. Cross-reaction between Streptococcus pneumoniae and group C streptococcal latex reagent. J. Clin. Microbiol. 25, 152-153, 1987.

22. Djibo S., Njanpop Lafourcade B.-M., Boisier P., Moussa A., Kobo G., Sidikou F., Hien A., Bieboure G., Aguilera J.- F., Parent du Chatelet I., Gessner B.D., Chanteau S. Evaluation of the Pastorex® meningitis kit for the rapid identification of Neisseria meningitidis serogroups A and W135. Transactions of the Royal Society of Tropical Medicine and Hygiene. 100:6 (573-578), 2006.

23. Shirokawa T., Nakajima J., Hirose K., Suzuki H., Nagaoka S., Suzuki M. Spontaneous meningitis due to Streptococcus salivarius subsp. salivarius: Cross-reaction in an assay with a rapid diagnostic kit that detected Streptococcus pneumoniae antigens. Internal Medicine. 53:3 (279-282), 2014.

24. Ozaki T., Nishimura N., Arakawa Y., Suzuki M., Narita A., Yamamoto Y., Koyama N., Nakane K., Yasuda N., Funahashi K. Community-acquired Acinetobacter baumannii meningitis in a previously healthy 14-month-old boy.

Journal of Infection and Chemotherapy. 15:5 (322-324), 2009.

(15)

15/16 [SE]

(16)

16/16 [SE]

BIO-RAD är ett varumärke som tillhör Bio-Rad Laboratories, Inc.

Alla varumärken som används häri tillhör respektive ägare

Bio-Rad

3, boulevard Raymond Poincaré 92430 Marnes-la-Coquette, Frankrike

Tel.: +33 (0) 1 47 95 60 00 2020/05

Fax: +33 (0) 1 47 41 91 33

16008552

www.bio-rad.com