Mikrobiologi
Biologi 2 Rosendalsgymnasiet
Dagen före labbstart:
Ympa 9 kolonier till 6 ml NaCl i ett sterilt Falconrör. Gör ett rör för
E.coli samt ett rör för S.aureus. (Detta räcker till 20 elevgrupper)
Eleverna jobbar i par och får antingen odla E.coli eller S.aureus. Odla
i 37 °C över natt.
Innan första lektionen dag 1:
Alikvotera ca 0,5 ml till 20 eppendorfrör. Märk med E.coli eller
S.aureus.
Till laborationen behövs 40 plattor totalt (till en klass m 40 elever), 1
agarplatta till dag 1 och 1 agarplatta till dag 2. Eleverna kan själva ta
med livsmedel/ämnen de vill testa (till dag 2)
Mikrobiologi
Biologi 2 Rosendalsgymnasiet
Odling av bakterier samt test av några antimikrobiella ämnen
Syftet med laborationen är att ni ska lära er några vanliga metoder för hur man odlar bakterier och för att lära er att jobba med sterilteknik. Dessutom ska ni testa några vanliga livsmedel och undersöka om dessa har någon antibakteriell effekt på bakterierna.
Det finns många mikroorganismer som naturligt producerar olika slag av antibiotika. Även i växter och djur kan det produceras antibakteriella ämnen som ett försvar mot angrepp av olika patogener. I den andra delen av laborationen ska ni testa 3-4 valfria produkter/livsmedel för att undersöka om de har någon antibakteriell effekt på bakterierna. Exempel på livsmedel som kan testas:
Olika sorters kryddor, vitlök, gul lök, ingefära, lingon, blåbär, honung, desinfektionsmedel, tvål, tandkräm mm
Säkerhet
Endast klass 1-organismer ska användas. Försiktighet iakttas om gasbrännare används.
DAG 1 – Renutstryk
Vid undersökningar av mikroorganismer vill man oftast arbeta med renkulturer. En renkultur är en odling i vilken samtliga celler härstammar från endast en ursprunglig cell. En sådan kultur kan åstadkommas genom att mikroorganismer gradvis späds ut, t.ex. genom
utstrykning på agarplatta. På så sätt får enskilda celler möjlighet att dela sig och utvecklas till en koloni. En väl åtskild koloni kan anses härstamma från en enda cell.
Material:
Eppendorför med antingen E.coli eller S.aureus 1 agarplatta
Steril ympnål, 2 st
Utförande - utstryk
1. Doppa ner den sterila ympnålen i bakteriesuspensionen. Gör ett primärstryk genom att stryka ut bakterierna i ett sicksackmönster över en del av agarytan, se figur 1 nedan. Sätt på locket. Släng ympnålen.
2. Ta en ny ympnål. Gör ett sekundärstryk genom att dra ympnålen en gång över utstryk 1 och stryk ut i ett sicksackmönster över en del av den rena agarytan, se figur 2 nedan.
3. Vänd på ympnålen så att den sida av öglan som inte varit i kontakt med bakterierna nu är mot agarplattan. Dra ympnålen en gång över utstryk 2 och stryk ut i ett sicksackmönster över en del av den rena agarytan, se figur 3 nedan. Sätt på locket.
4. Märk undersidan av agarplattan med namn och bakterietyp. Ställ in plattorna med locket nedåt i inkubatorn (37 °C) över natt.
Mikrobiologi
Biologi 2 Rosendalsgymnasiet
Bild från bioresurs.uu.se
DAG 2 – Test av antibakteriella ämnen
I denna del av laborationen ska ni testa 3-4 valfria produkter/livsmedel för att undersöka om de har någon antibakteriell effekt på bakterierna. Metoden innebär att en bakteriesuspension sprids ut på en agarplatta. På plattan placeras de ämnen ni vill undersöka. En klar zon utan bakterieväxt bildas runt de prover som är giftiga för bakterierna – ju större diameter på avdödningszonen desto giftigare.
Material:
Renkultur på agarplatta (från odlingen dag 1) 1 agarplatta
Steril ympnål
Sterila bomullspinnar Steril NaCl (0.9%)-lösning 1 eppendorfrör/Falconrör 3- 4 valfria ämnen/livsmedel E v filterpapper uttryckta i cirklar E v pasteurpipetter
Utförande
1. Märk agarplattan med bakteriens namn och dina initialer.
2. Överför med en ympnål 4 bakteriekolonier från din bakterieodling till ett eppendorfrör med 0,5 ml steril 0,9% NaCl-lösning.
3. Slamma upp bakterierna med hjälp av ympnålen så att du får en jämn suspension. (Kan e v blandas med vortex)
4. Tag en steril bomullsarmerad pinne och doppa i bakteriesuspensionen. Sprid ut bakteriesuspensionen med bomullspinnen TÄTT på en ny agarplatta, se nedan!
a. Börja med att stryka ett kors över plattan b. Stryk tätt på översta halvan av plattan c. Vänd 90 ° och stryk över den nu övre halvan d. Vänd 90 ° och stryk över den nu övre halvan
Mikrobiologi
Biologi 2 Rosendalsgymnasiet
e. Vänd 90 ° och stryk över den nu övre halvan Hela ytan ska täckas!
5. Följande tre metoder används beroende på vilket ämne som testas:
Olika lösningar kan testas genom att små runda filterpapperslappar, som tagits ut med hålslag, doppas i testlösningar. Lapparna placeras sedan på agarytan med de utstrukna bakterierna. Använd steril preparernål eller pincett för att placera ut lapparna. Se till att inte ett överskott av vätska följer med lappen – håll den mot kanten av kärlet så att överskottet rinner av. Om resultaten ska kunna jämföras måste alla lapparna behandlas likadant.
Använd baksidan av en glaspipett som kan steriliseras och ta ut brunnar i agarskiktet. Brunnarna kan sedan fyllas med pulver eller lösningar.
Bitar av fasta ämnen kan placeras direkt på ytan. Märk undersidan av petriskålen med vilka ämnen som testas.
6. Låt plattorna stå framme i rumstemperatur minst 30 minuter. Lägg plattorna i plastpåse. Inkuberas i 37°C till nästa dag då hämningszonernas storlek avläses.
Dag 3 – Analys av hämningszoner
Studera resultatet av odlingen utan att öppna locket på agarplattan. Hämningszonernas diameter ger ett mått på hur känslig bakterien är för det antibakteriella ämnet. Jämför de tre-fyra brunnarna som du har testat på din agarplatta.
Bild från bioresurs.uu.se Hämningszon, diameter
mäts
